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细胞培养常见问题解答
点击次数:983 发布时间:2017-09-14
      1为什么要在溶解的一周内使用贮存在4℃冰箱中的液体胰蛋白酶溶液?
 
  答:胰蛋白酶在4℃就可能开始降解,如果在室温下放置超过30分钟,就会变得不稳定。
 
  2怎样查到一个特定细胞株的相关知识和培养条件?
 
  答:ATCC(AmericanTypeCultureCollection)收集了绝大多数细胞的详细资料。打开ATCC网页的Cellsandhybridomas链接,输入细胞名称就可以搜索ATCC的细胞数据库。数据库中有每一种细胞的详细描述,包括细胞的来源,培养和冻存条件,以及相关文献等资料。
 
  3支原体(mycoplasma)污染的细胞,是否能以肉眼观察出异状?
 
  答:不能。除极有经验之专家外,大多数遭受支原体污染的细胞株,无法以其外观分辨之。
 
  4细胞的渗透压耐受性是多少?
 
  答:细胞必须生活在等渗环境中,大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性。人血浆渗透压290mOsm/kg,可视为培养人体细胞的理想渗透压。鼠细胞渗透压在320mOsm/kg左右。对于大多数哺乳动物细胞,渗透压在260-320mOsm/kg的范围都适宜。
 
  5培养细胞出现死亡其可能的原因有什么?解决办法有哪些?
 
  答:可能的原因有培养箱内无CO2;培养箱内温度波动太大;细胞冻存或复苏过程中损伤;培养液渗透压不正确;培养液中有毒代谢产物堆积等。
 
  解决办法可以检测培养箱内CO2浓度,检查培养箱内温度;取新的保存细胞种;检测培养液渗透压等;换入新鲜培养液等。
 
  6如何消除组织培养的污染?
 
  答:当重要的培养细胞污染时,研究者可能试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。
 
  高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是推荐的确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤。
 
  1)在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。
 
  2)分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生素加入到每一个孔中。例如,两性霉素B推荐下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0mg/ml。
 
  3)每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。
 
  4)确定抗生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2-3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2-3代。
 
  5)在无抗生素的培养基中培养细胞一代。
 
  6)重复步骤4。
 
  7)在无抗生素的培养基中培养4-6代,确定污染是否以已被消除。
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