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细胞分布不均及解决办法
点击次数:1462 发布时间:2017-07-07
问:我的细胞接种培养板,细胞总是聚集在周边部分,该如何处理啊?我看园子里有的战友的细胞却是聚集在中间,是不是板子的质量题目啊?
答:请问你的细胞是如何混匀的?是滴管奏乐还是振荡培养板?假如是后者,而且是转圈摇匀的话,很有可能由于离心力的作用使细胞甩到周边部分,导致细胞中间少,四周多!自己可是试试!
周边一般是相对会多一点,但是中间的数目也不会很少啊~~ 展板的时候我也没有特异往振荡培养板。
大概是板子的质量题目吧或者是不是展板时候的细胞密度太低了?我用的corning的板 。
一个好办法:在你培养种板之前,把培养板放进培养箱里进行几个小时的饱和后再取出,种进细胞时气力要轻,可采取用滴头在培养板孔的侧面慢慢加进让细胞悬液流进板孔中,培养的细胞基本是均匀生长。记住千万不要用振荡器振荡,否则你的细胞就会想你说得那样聚积在一起。
我今天把培养板放进培养箱里几个小时,适当的把细胞密度加大了一下,另外多加了一点培养液,今晚看细胞展的挺好的。我以为有两种可能解决你题目的办法:1.加进前奏乐均匀;2.从多孔板侧边或底边缓慢加进。

问:我在做原代培养时也碰到过这种情况,我一直以为培养皿展胶不均匀会导致这种现象,由于混匀的血管段加进到培养皿中时,在相差显微镜下血管段均匀分布在培养皿中,24h后贴壁的血管段就是周边多,中间相对少些。下次我要试试hkqu战友的方法看能否改变这种现象。

答:这种现象很正常呀,不知你仔细观察过没有,孔直径愈小,这个现象越明显,我试过,24、96孔板这种现象不可避免,由于液体的附壁使得孔内培养液不是成一个液平面,而是周边高,就像凹镜一样,而使用这两种孔板由于需要加干预等原因而不能加足量培养液,使得细胞随培养液一起出现“边集”现象,假如为了使孔中心也有均匀细胞而增加接种细胞数目的话,这要看你需要观察何种指标,假如是MTT ,免疫组化的话会由于细胞成层而影响结果。
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