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荧光酶标仪与光吸收酶标仪原理及区别
点击次数:10101 发布时间:2016-08-22
 导读:酶标仪是构成酶免检验工作站的其中一种医疗器械,还有一个比较重要的设备是洗板机,酶标仪有荧光酶标仪和光吸收酶标仪之分,那么荧光酶标仪原理与光吸收酶标仪原理有什么区别呢?具体内容如下所示:

荧光酶标仪原理

由光源氙弧灯发出的光通过切光器使其变成断续之光以及激发光单色器变成单色光后,此光即为荧光物质的激发光,被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光,经过单色器变成单色荧光后照射于测样品用的光电倍增管上,由其所发生的光电流经过放大器放大输至记录仪,激发光单色器和荧光单色器的光栅均由电动机带动的凸轮所控制,当测绘荧光发射光谱时,将激发光单色器的光栅,固定在zui适当的激发光波长处,而让荧光单色器凸轮转动,将各波长的荧光强度讯号输出至记录仪上,所记录的光谱即发射光谱。

当测绘荧光激发光谱时,将荧光单色器的光栅固定在zui适当的荧光波长处,只让激发光单色口的凸轮转动,将各波长的激发光的强度讯号输出至记录仪,所记录的光谱即激发。

当进行样品溶液的定量分析时,将激发光单色器固定在所选择的激发光波长处,将荧光单色器调节至所选择的荧光波长处,由记录仪得出的信号是样品溶液的荧光强度。

光吸收酶标仪原理

光是电磁波,波长100nm~400nm称为紫外光,400nm~780nm之间的光可被人眼观察到,大于780nm称为红外光。光吸收酶标仪测定的原理是在特定波长下,检测被测物吸光值。jjymafwh

光通过被检测物,前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量,特定波长下,同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。

检测单位用OD值表示,OD是opticaldelnsity(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度,OD=1og(1/trans),其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则,OD值与光强度成下述关系:E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度,Ι0为在检测物之前的光强度,Ι为从被检测物出来的光强度。

OD值由下述公式计算:

E=OD=C×D×E

C为检测物的浓度

D为检测物的厚度

E为摩尔因子

在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长,在此波长下,此物质能够吸收zui多的光能量。如果选择其它的波长段,就会造成检测结果的不准确。因此,在测定检测物时,我们选择特定的波长进行检测,称为测量波长。

但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收,为了消除这种非特异性吸收,我们再选取一个参照波长,以消除这个不准确性。在参照波长下,检测物光的吸收zui小。酶标仪检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。 
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